CIK细胞是细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)，经外周血/骨髓/脐血来源的单个核细胞在体外经过多种细胞因子(如抗CD3单克隆抗体、IL-2和IFN-γ等)刺激诱导培养后获得的一群异质细胞。主要效应细胞为CD3+/CD56+细胞，由于同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又被称为NK细胞样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。

CIK细胞通过以下机制对肿瘤细胞发挥杀伤作用：

(1)与靶细胞结合并释放穿孔素及颗粒酶对靶细胞发挥直接杀伤作用;

(2)产生大量细胞因子(如 IFN-γ，TNF-α，IL-2 等)间接杀伤肿瘤细胞;

(3)调节免疫系统发挥间接杀伤作用;

(4)诱导肿瘤细胞凋亡和坏死。

1）CD3激发型单抗

CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。

2）IL-2 (白细胞介素-2)

IL-2是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。它既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。

3）IFN-γ(干扰素-γ)

 IFN-γ具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用。研究发现，IFN-γ加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。先加入IFN-γ，培养24小时后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。

4） IL-1α (白细胞介素-1α) 　

 IL-1α也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1α与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK 的细胞毒作用。

CIK细胞治疗属于过继细胞免疫疗法，由于CIK细胞溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受肿瘤组织类型的限制，因此对任何一种肿瘤均有杀伤作用。临床证明，CIK 细胞免疫治疗能克服传统治疗方式手术、放疗和化疗的不彻底、易转移以及副作用大等弊端。在体内微小残留病灶的清除，防止癌细胞扩散和复发，提高患者自身免疫力，减少毒性反应等方面具有重要作用，有效延长患者的生存期，提高生活质量。

截至2020年上半年，美国临床试验数据库(ClinicalTrials.gov)显示，CIK/DC-CIK细胞治疗的相关临床研究有108项，其中非洲1项、东亚87项、欧洲5项、中东1项、北美5项、美国5项、东南亚4项。涉及的疾病主要包括胰腺癌、胃癌、食管癌、 膀胱癌、难治性非霍奇金淋巴瘤、结直肠癌、肺癌、 肝癌、肾癌、三阴性乳腺癌、急性白血病、B细胞淋巴瘤等实体瘤和血液瘤。CIK细胞具备广谱抗瘤活性，在细胞免疫治疗中作用显著！

图一 CIK细胞培养流程图

CIK 细胞体外扩增的一般培养方案需要 2-3周，并添加 IFN-γ、抗CD3抗体和 IL-2。

主要步骤如下：

在第0天，通过密度梯度离心从全血中分离PBMC并用 IFN-γ 处理以激活巨噬细胞，进一步提供细胞因子介导的 (IL-12) 和接触依赖性 (CD58/LFA-3) 信号以促进 CIK 细胞的细胞毒力。

第1天，将抗CD3抗体和 IL-2 添加到培养基中。抗CD3抗体将为T细胞提供有丝分裂信号，然后通过 IL-2 的持续存在来维持增殖。

每2天添加一次含有 IL-2 的新鲜培养基。培养2-3周后，增殖的CIK 细胞经质检合格后被注入患者体内。

1）PBMC计数及活率测定

从PBMC的分离至CIK细胞的增殖收获过程，需要及时监测细胞的生长状态，细胞计数是必不可少的检测方式。

Countstar Rigel可以精确计数分离后PBMC的浓度以及活率。用双荧光染料为血液样本直接染色进行图像分析获得数据，使细胞分离不再是必须，有效排除干扰物质对细胞计数的影响。

图二 PBMC活率检测

2）CIK培养中的细胞检测

细胞表型分析-CD maker检测

CD maker的测定是免疫细胞治疗很有参考价值的指标。

Countstar Rigel提供了更为快速和操作简便的方法使细胞分型工作更加高效。通过可见的细胞图像和强大的数据分析功能，不需要大量复杂的对照设置及荧光补偿调整，即可获得稳定可靠的结果。

CIK经CD3-FITC, CD56-PE抗体染色后的视野图：

图三 CD3-FITC/CD56-PE检测视野图